Сдать анализ на антитела ИФА к коронавирус COVID-19 в Москве в клинике - ИММА

Сдать анализ на антитела ИФА к коронавирус COVID-19 в Москве в клинике — ИММА

ELISA

В лунки 96-ти луночного планшета для проведения иммуноанализа добавьте 100 мкл буферного раствора для иммобилизации, содержащего антитела. Мы рекомендуем использовать конечную концентрацию антител для иммобилизации в диапазоне 5-10 мкг/мл. Проведите инкубацию в течение 2 часов при комнатной температуре и постоянном перемешивании на горизонтальном шейкере для планшетов, либо в течение ночи при +4℃. Для удаления несвязавшихся антител, промойте 1 раз планшет буферным раствором для промывки (PBST)

Инкубация с антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена

В лунки планшета внесите по 100 мкл раствора специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная концентрация большинства конъюгированных антител производства ООО фирмы «Имтек» составляет 0,1 мкг/мл. Проведите инкубацию при комнатной температуре в течение 60 минут при постоянном перемешивании. Для удаления несвязавшихся конъюгированных антител, проведите отмывку планшета раствором PBST 5-6 раза.

Проведение ферментативной реакции

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата (ТМБ) и инкубируют в течение 5-10 минут при комнатной температуре и постоянном перемешивании, в защищенном от света месте до появления в лунках синего окрашивания разной интенсивности

Остановка ферментативной реакции

Остановка реакции проводится добавлением в каждую лунку планшета по 50 мкл 0,5М серной кислоты. Окраска стабильна в течение 30 мин

Измерение оптической плотности

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при длине волны 450 нм с использованием планшетного спектрофотометра

Общий иммуноглобулин А (IgA общий)

Immunoglobulin A — гликопротеины, которые синтезируются в основном плазматическими клетками слизистых оболочек в ответ на местное воздействие антигена.

В организме человека IgA существует в двух формах – сывороточной и секреторной. Время их полужизни – 6-7 суток. Секреторный IgA обладает димерной структурой и устойчив к воздействию ферментов благодаря особенностям строения. Секреторный IgA находится в слезах, поте, слюне, молоке и молозиве, секретах бронхов и желудочно-кишечного тракта и защищает слизистые оболочки от инфекционных агентов. 80-90 % циркулирующих в крови IgA состоят из сывороточной мономерной формы данного класса антител. IgA входят во фракцию гамма-глобулинов и составляют 10-15 % от всех иммуноглобулинов крови.

Читайте также:  Отделение репродуктологии - ГБУЗ МО МОНИИАГ

Антитела класса IgA являются важным фактором местной защиты слизистых оболочек. Они связываются с микроорганизмами и предотвращают их проникновение с внешних поверхностей вглубь тканей, усиливают фагоцитоз антигенов путем активации комплемента по альтернативному пути. Достаточный уровень IgA в организме препятствует развитию IgЕ-зависимых аллергических реакций. IgA не проникают через плаценту, но поступают в организм ребенка с молоком матери при кормлении.

Селективный дефицит IgA является одним из наиболее распространенных иммунодефицитов в популяции. Частота – 1 случай на 400-700 человек. Данная патология часто протекает бессимптомно. Дефицит IgA может проявиться аллергическими заболеваниями, рецидивирующими респираторными или желудочно-кишечными инфекциями, нередко ассоциируется с аутоиммунной патологией (сахарным диабетом, системной красной волчанкой, ревматоидным артритом, пернициозной анемией). Дефицит IgA иногда сочетается с недостаточным уровнем IgG-2 и IgG-4, что приводит к более выраженным клиническим признакам иммунодефицита.

Для чего используется исследование?

  • Для оценки местного гуморального иммунитета.
  • Для диагностики иммунодефицитных состояний.
  • Для диагностики причин рецидивов бактериальных, вирусных, грибковых и паразитарных инфекций.
  • Для диагностики состояния иммунной системы при аутоиммунных патологиях, заболеваниях крови и новообразованиях.

Когда назначается исследование?

  • При обследовании детей и взрослых, подверженных частым рецидивирующим респираторным, кишечным и/или урогенитальным инфекциям.
  • При мониторинге лечения миеломной болезни IgA-типа.
  • При обследовании пациентов с системными заболеваниями соединительной ткани (аутоиммунной патологией).
  • При комплексном исследовании состояния иммунной системы.
  • При новообразованиях кроветворной и лимфоидной тканей.
  • При наблюдении за пациентами с иммунодефицитами.

Elisa анализ крови

ИФА (ELISA) – иммуноферментный анализ – лабораторное исследование, позволяющее определить присутствие в крови ВИЧ-антител; тест на ВИЧ-антитела.

ВИЧ: диагностика методом ИФА

К числу наиболее апробированных непрямых методов диагностики ВИЧ- инфекции относится метод, позволяющий обнаруживать в организме не сам ВИЧ, а антитела к его антигенам, которые появляются в крови у ВИЧ- инфицированных пациентов. Иммунная система организма почти сразу реагирует на присутствие ВИЧ, выпуская против него антитела, их и пытаются в первую очередь обнаружить медики, используя специальные диагностикумы (тест-системы), основанные на иммуноферментном анализе (ИФА).

В этом анализе используется два типа реакций: иммунологическая и ферментативная.

Все вариации ИФА основаны на способности антител специфически взаимодействовать только с «собственными» антигенами, т.е. на иммунологической реакции «антиген-антитело».

Наибольшее распространение получил гетерогенный вариант иммуноферментного анализа, при котором антиген (определяемое соединение) или антитела фиксируется на твердой основе, в качестве которой могут выступать полистироловый планшет, полистироловые бусины, пористая подложка или магнитный носитель. Анализ проводят в 3 стадии (рис. ). В лунку планшета, содержащую на своих стенках тот или иной антиген (т.е. один из белков вируса), добавляют исследуемый биологический материал — сыворотку крови больного. При наличии в организме инфекционного агента, в сыворотке появляются антитела к нему. Они прочно связываются с антигеном и не удаляются при последующей промывке чашки.

На следующем этапе необходимо определить, образовался или нет в лунке иммунный комплекс, то есть произошло ли соединение антигена с антителом. Простым глазом или под микроскопом это нельзя увидеть, поэтому требуются следующие две стадии, которые можно назвать проявляющими.

На второй стадии анализа в лунку вносят специальные (реагирующие с разными антителами) антитела с заранее прикрепленным к ним ферментом (поэтому метод называется ферментным). Слитый в единый комплекс «антитело-фермент» (конъюгат) способен связаться с антителами, уже зацепившимися за антиген, который закреплен на твердой подложке. В результате возникает «молекулярная цепочка», на одном конце которой вирусный белок, а на другом — фермент. После отмывки весь этот многослойный «пирог» остается в лунке планшета. Теперь нужно обнаружить активность фермента, чтобы сделать вывод о наличие антитела. Для этого на третьей стадии в ту же лунку вносят раствор субстрата и специального бесцветного вещества — хромогена, который способен окрашиваться в результате серии биохимических реакций, осуществляемых присутствующим в лунке ферментом. Если в лунке появляется окраска, это означает, что все элементы цепочки присутствуют. Из этого следует вывод: в крови пациента имеются антитела к антигенам ВИЧ и, следовательно, сам пациент инфицирован этим вирусом.

Существуют и другие варианты метода ИФА. Например, можно детектировать не антитела, а сам антиген. Процедура в целом будет похожей, хотя немного более сложной.

Так как ВИЧ-инфекция длится пожизненно, то для диагностики достаточно самого факта обнаружения антител на любом этапе развития заболевания. Обнаружение антител с помощью ИФА является очень чувствительным методом, который выявляет свыше 99% ВИЧ-инфицированных.

Для проведения ИФА необходимо осуществить несколько операций. (А) На первом этапе к антигену, сорбированному на твердой поверхности (1), добавляют сыворотку крови, содержащую антитело (2). Затем в лунку вносят неспецифические антитела, слитые с ферментом (такой комплекс называют коньюгатом) (3). На конечном этапе (4) в ту же лунку вносят способное окрашиваться вещество — хромоген. Если образуется комплекс-«пирог» (Б), то хромоген под действием фермента расщепляется и появляется окраска. Это означает, что все элементы цепочки присутствуют, «пирог» испекся, и результат тестирования антител положительный.

Ссылка на основную публикацию
Сглаженные извилины головного мозга
Лиссэнцефалия и ее причины Лисснцефалия – врождённая патология, при которой у человека сглажены извилины или, в прямом смысле слова, нет...
Светодиодная фотодинамическая Led маска для омоложения кожи лица и накладкой для шеи Beauty Pro (7 ц
Новое в косметологии: фотодинамическая терапия В Туле появился прогрессивный и безопасный способ лечения проблем кожи — фотодинамическая терапия на аппарате...
Светолечение в физиотерапии показания и противопоказания, алгоритм проведения, светотепловые ванны
Лампы для прогрева тела (физиотерапии) Что такое лампы для прогрева: В недалеком прошлом для прогревания тела использовали «синюю лампу» –...
Сгусток крови из заднего прохода что это может быть
Ректальные кровотечения Кровотечение, кровь в стуле, примесь крови к испражнениям - один из часто встречающихся симптомов заболеваний прямой и ободочной...
Adblock detector